1.范围
本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)的检验方法。
本标准第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验;第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较髙的食品中金黄色葡萄球菌的计薮;第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低的食品中金黄色葡萄球菌的计数。
2.设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下：
2.1 恒温培养箱:36℃±1℃。
2.2 冰箱:2℃～5℃。
2.3 恒温水浴箱:36℃～56℃。
2.4 天平:感量0.1g。
2.5 均质器。
2.6 振荡器。
2.7 无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。
2.8 无菌锥形瓶:容量100mL、500mL。
2.9 无菌培养皿:直径90mm。
2.10 涂布棒。
2.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
3.培养基和试剂
3.1 7.5%氯化钠肉汤:见A.1。
3.2 血琼脂平板:见A.2。
3.3 Baird- Parker琼脂平板:见A.3。
3.4 脑心浸出液肉汤(BHI):见A.4。
3.5 兔血浆:见A.5。
3.6 稀释液:磷酸盐缓冲液:见A.6。
3.7 营养琼脂小斜面:见A.7。
3.8 革兰氏染色液:见A.8。
3.9 无菌生理盐水:见A.9。
第一法 金黄色葡萄球菌定性检验
4.检验程序
金黄色葡萄球菌定性检验程序见图1。
5.操作步骤
5.1 样品的处理
称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤的无菌均质杯内,8000r/min～10000r/min均质lmin～2min,或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态,吸取25mL样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中,振荡混匀。
5.2 增菌
将上述样品匀液于36℃士1℃培养18h~24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。
5.3 分离
将增菌后的培养物,分别划线接种到 Baird- Parker平板和血平板,血平板36℃±1℃培养18h～24h。Baird- Parker平板36℃士1℃培养24h～48h。
5.4 初步鉴定
金黄色葡萄球菌在 Baird- Parker平板上呈圆形,表面光滑、凸起、湿润、菌落直径为2mm～3mm,颜色呈灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清晰带外,其他外观基本相同。从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色常较典型菌落浅些且外观可能较粗糙,质地较干燥。在血平板上,形成菌落较大,圆形、光滑凸起、湿润、金黄色(有时为白色）菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述可疑菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。
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